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凝集素芯片应用集锦

发布时间:2019-01-11 15:02 |  点击次数:

       凝集素(lectin)是自然界广泛存在具有识别和结合特定糖链的蛋白质,被广泛应用于糖基化修饰研究。BCBIO-LectinArray芯片点制固定56种经典凝集素,覆盖识别响应绝大部分糖链结构,是研究动物、植物、细菌、真菌细胞或蛋白高通量检测糖基化修饰的高效工具。
       广州博翀生物凝集素芯片介绍:
 


      凝集素芯片应用方案分享:
 
实体瘤等疾病组织临床样本糖基化标志物发现与验证
 
实验阶段 实验内容 实验说明
第一阶段:
糖基化标志物筛选
蛋白准备与标记 对疾病组织样本和健康对照样本进行抽提蛋白定量,并生物素或荧光标记。
Lectin芯片
检测糖基化差异
将标记后的疾病组和健康组蛋白与LectinArray芯片进行孵育检测,并分析疾病组和健康对照的糖基化差异,获得候选凝集素差异列表。
第二阶段:
糖基化标志物验证
标志物蛋白
糖基化差异验证
准备大样本进行蛋白抽提;选择1-5个候选差异凝集素,使用凝集素ELISA试剂盒进行大样本糖基化差异验证。

参考文献:
Li, Y. et al. Detection and verification of glycosylation patterns of glycoproteins from clinical specimens using lectin microarrays and lectin-based immunosorbent assays. Anal Chem 83, 8509-8516, doi:10.1021/ac201452f (2011).
 
血清临床样本糖基化标志物发现与验证
 
实验阶段 实验内容 实验说明
第一阶段:
糖基化差异筛选
蛋白准备与标记 血清疾病样本和健康对照样本,进行蛋白定量,并生物素标记。
LectinArray检测糖基化差异 生物素标记的疾病和健康对照血清蛋白孵育LectinArray,然后用荧光素标记的链霉亲和素进行检测,并分析疾病和健康对照的糖基化差异。
第二阶段:
标志物糖基化验证
大样本糖基化差异验证 选择1-5个候选差异凝集素,使用凝集素ELISA试剂盒进行大样本糖基化差异验证。

参考文献:
Zhong, Y, et al. "Serum Glycopatterns as Novel Potential Biomarkers for Diagnosis of Acute-on-Chronic Hepatitis B Liver Failure." Sci Rep 7(2017):45957.

 
细胞膜差异糖基化发现与验证
 
实验阶段 实验内容 实验说明
第一阶段:
细胞糖基化差异发现
细胞准备与标记 不同类型的细胞株(癌细胞株),或相同细胞实验组处理(如不同培养条件,药物或病原菌刺激等),3组实验重复, 进行荧光素标记。
LectinArray检测糖基化差异 荧光素标记的不同细胞株或实验组细胞孵育LectinArray,然后检测分析不同细胞系或实验组细胞糖基化差异。
第二阶段:
细胞差异糖基化验证
细胞差异糖基化进行凝集素标记与FACS验证 使用差异糖基化的Lectin3-5个)进行荧光素标记,然后对不同细胞系或实验组细胞进行标记,使用流式细胞仪进行细胞群定量检测。

参考文献:
Tao, S, et al. "Lectin microarrays identify cell-specific and functionally significant cell surface glycan markers." Glycobiology 18.10(2008):761-769.
Zhou, S, et al. "Lectin RCA-I specifically binds to metastasis-associated cell surface glycans in triple-negative breast cancer." Breast Cancer Research Bcr 17.1(2015):1-14.
Lynch, K, et al. "Regulating Immunogenicity and Tolerogenicity of Bone Marrow-Derived Dendritic Cells through Modulation of Cell Surface Glycosylation by Dexamethasone Treatment:." Frontiers in Immunology 8(2017).
Xin, A, et al. "Comparative analysis of human sperm glycocalyx from different freezability ejaculates by lectin microarray and identification of ABA as sperm freezability biomarker. " Clinical Proteomics 15.1(2018):19

 
抗体药质控差异糖基化发现与验证
 
实验阶段 实验内容 实验说明
第一阶段:抗体药糖基化差异发现 抗体药准备与标记 不同药效,或不同批次类型的抗体药进行荧光素标记。
LectinArray检测糖基化差异 荧光素标记的抗体药孵育LectinArray,然后检测分析不同细胞系或实验组细胞糖基化差异。
第二阶段:
细胞差异糖基化验证
抗体药差异糖基化使用凝集素ELISA验证 使用差异糖基化的lectin试剂盒,进行精确定量检测。
参考文献:
Zhang, Lei, et al. "The use of lectin microarray for assessing glycosylation of therapeutic proteins." Mabs 8.3(2016):524-535.

自身抗体糖基化差异研究
 
 
实验阶段 实验内容 实验说明
第一阶段:
自身抗体糖基化差异研究
样本准备 血清疾病样本和健康对照样本,进行IgG纯化
LectinArray检测糖基化差异 疾病和健康对照血清蛋白孵育LectinArray,并分析疾病和健康对照的糖基化差异。
第二阶段:
差异糖基化验证
大样本糖基化差异验证 选择1-5个候选差异凝集素,使用凝集素ELISA试剂盒进行大样本验证

参考文献:
Yuan S, et al., Changes in Anti-Thyroglobulin IgG Glycosylation Patterns in Hashimoto's Thyroiditis Patients. [J]. The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, 2015, 100(2):717-724.