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凝集素芯片应用集锦
发布时间:2019-01-11 15:02 | 点击次数:
凝集素(lectin)是自然界广泛存在具有识别和结合特定糖链的蛋白质,被广泛应用于糖基化修饰研究。BCBIO-LectinArray芯片点制固定56种经典凝集素,覆盖识别响应绝大部分糖链结构,是研究动物、植物、细菌、真菌细胞或蛋白高通量检测糖基化修饰的高效工具。
广州博翀生物凝集素芯片介绍:
凝集素芯片应用方案分享:
实体瘤等疾病组织临床样本糖基化标志物发现与验证
实验阶段 | 实验内容 | 实验说明 |
第一阶段: 糖基化标志物筛选 |
蛋白准备与标记 | 对疾病组织样本和健康对照样本进行抽提蛋白定量,并生物素或荧光标记。 |
Lectin芯片 检测糖基化差异 |
将标记后的疾病组和健康组蛋白与LectinArray芯片进行孵育检测,并分析疾病组和健康对照的糖基化差异,获得候选凝集素差异列表。 | |
第二阶段: 糖基化标志物验证 |
标志物蛋白 糖基化差异验证 |
准备大样本进行蛋白抽提;选择1-5个候选差异凝集素,使用凝集素ELISA试剂盒进行大样本糖基化差异验证。 |
参考文献:
Li, Y. et al. Detection and verification of glycosylation patterns of glycoproteins from clinical specimens using lectin microarrays and lectin-based immunosorbent assays. Anal Chem 83, 8509-8516, doi:10.1021/ac201452f (2011).
血清临床样本糖基化标志物发现与验证
实验阶段 | 实验内容 | 实验说明 |
第一阶段: 糖基化差异筛选 |
蛋白准备与标记 | 血清疾病样本和健康对照样本,进行蛋白定量,并生物素标记。 |
LectinArray检测糖基化差异 | 生物素标记的疾病和健康对照血清蛋白孵育LectinArray,然后用荧光素标记的链霉亲和素进行检测,并分析疾病和健康对照的糖基化差异。 | |
第二阶段: 标志物糖基化验证 |
大样本糖基化差异验证 | 选择1-5个候选差异凝集素,使用凝集素ELISA试剂盒进行大样本糖基化差异验证。 |
参考文献:
Zhong, Y, et al. "Serum Glycopatterns as Novel Potential Biomarkers for Diagnosis of Acute-on-Chronic Hepatitis B Liver Failure." Sci Rep 7(2017):45957.
细胞膜差异糖基化发现与验证
实验阶段 | 实验内容 | 实验说明 |
第一阶段: 细胞糖基化差异发现 |
细胞准备与标记 | 不同类型的细胞株(癌细胞株),或相同细胞实验组处理(如不同培养条件,药物或病原菌刺激等),3组实验重复, 进行荧光素标记。 |
LectinArray检测糖基化差异 | 荧光素标记的不同细胞株或实验组细胞孵育LectinArray,然后检测分析不同细胞系或实验组细胞糖基化差异。 | |
第二阶段: 细胞差异糖基化验证 |
细胞差异糖基化进行凝集素标记与FACS验证 | 使用差异糖基化的Lectin(3-5个)进行荧光素标记,然后对不同细胞系或实验组细胞进行标记,使用流式细胞仪进行细胞群定量检测。 |
参考文献:
Tao, S, et al. "Lectin microarrays identify cell-specific and functionally significant cell surface glycan markers." Glycobiology 18.10(2008):761-769.
Zhou, S, et al. "Lectin RCA-I specifically binds to metastasis-associated cell surface glycans in triple-negative breast cancer." Breast Cancer Research Bcr 17.1(2015):1-14.
Lynch, K, et al. "Regulating Immunogenicity and Tolerogenicity of Bone Marrow-Derived Dendritic Cells through Modulation of Cell Surface Glycosylation by Dexamethasone Treatment:." Frontiers in Immunology 8(2017).
Xin, A, et al. "Comparative analysis of human sperm glycocalyx from different freezability ejaculates by lectin microarray and identification of ABA as sperm freezability biomarker. " Clinical Proteomics 15.1(2018):19
抗体药质控差异糖基化发现与验证
实验阶段 | 实验内容 | 实验说明 |
第一阶段:抗体药糖基化差异发现 | 抗体药准备与标记 | 不同药效,或不同批次类型的抗体药进行荧光素标记。 |
LectinArray检测糖基化差异 | 荧光素标记的抗体药孵育LectinArray,然后检测分析不同细胞系或实验组细胞糖基化差异。 | |
第二阶段: 细胞差异糖基化验证 |
抗体药差异糖基化使用凝集素ELISA验证 | 使用差异糖基化的lectin试剂盒,进行精确定量检测。 |
Zhang, Lei, et al. "The use of lectin microarray for assessing glycosylation of therapeutic proteins." Mabs 8.3(2016):524-535.
自身抗体糖基化差异研究
实验阶段 | 实验内容 | 实验说明 |
第一阶段: 自身抗体糖基化差异研究 |
样本准备 | 血清疾病样本和健康对照样本,进行IgG纯化 |
LectinArray检测糖基化差异 | 疾病和健康对照血清蛋白孵育LectinArray,并分析疾病和健康对照的糖基化差异。 | |
第二阶段: 差异糖基化验证 |
大样本糖基化差异验证 | 选择1-5个候选差异凝集素,使用凝集素ELISA试剂盒进行大样本验证 |
参考文献:
Yuan S, et al., Changes in Anti-Thyroglobulin IgG Glycosylation Patterns in Hashimoto's Thyroiditis Patients. [J]. The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, 2015, 100(2):717-724.